Добармикроскоптреба да има три карактеристике:
Добра резолуција: Способност резолуције се односи на способност стварања одвојених слика блиско постављених објеката тако да се могу разликовати као два одвојена ентитета. Резолуција:
Приближно 0.2 мм (200 μм) голим оком
Оптички микроскоп је око 0.2μм
Електронска микроскопија је око 0.5 нм
. Резолуција зависи од индекса преламања. Уље има већи индекс преламања од ваздуха.
Добар контраст: може се додатно побољшати бојењем узорка.
Добро увећање: Ово се постиже коришћењем конкавних сочива.
Светло поље или светлосна микроскопија
Светло поље или светлосна микроскопија даје тамне слике на светлијој позадини.
микроскопија тамног поља
Принцип: У микроскопији тамног поља, објекти изгледају светли на тамној позадини. Ово се може постићи коришћењем специјалних кондензатора тамног поља.
Примене: Користи се за идентификацију одрживих, необаљених ћелија и танких бактерија као што су спирохете које се не могу посматрати светлосном микроскопијом.
фазни контрастни микроскоп
Он визуализује живе ћелије стварајући контрастне разлике између ћелија и воде. Он претвара суптилне разлике у индексу преламања и густини ћелија у лако уочљиве промене у интензитету светлости.
Корисно за проучавање:
кретање микроба
Одредите облик живих ћелија
Откријте бактеријске компоненте као што су ендоспоре и инклузивна тела.
Флуоресцентни микроскоп
Како то функционише: Када су флуоресцентне боје изложене ултраљубичастом (УВ) светлу, оне се побуђују и флуоресцирају, односно претварају овај невидљиви зрак кратке таласне дужине у светлост дуже таласне дужине (видљива светлост).
Примене: Епифлуоресцентна микроскопија има следеће примене:
Аутофлуоресцира када се стави под УВ светло, као што је циклоспорин
Микроорганизми обложени флуоресцентним бојама, као што је атриол наранџаста за паразите маларије (КБЦ) и ауринол за Мицобацтериум туберцулосис.
Имунофлуоресценција: Користи антитела обележена флуоресцентним бојама за откривање антигена на површини ћелије или антитела која се везују за антигене површине ћелије. Постоје три типа: директни ИФ, индиректни ИФ и проточна цитометрија.
електронски микроскоп
Измислио ју је Ернст Руска 1931. Она се разликује од светлосне микроскопије на другачији начин.
Постоје две врсте ЕМ:
ЕМ преноса (МЦ тип, испитује унутрашњу структуру, резолуција 0.5 нм, даје дводимензионални приказ)
ЕМ скенирање (испитује површину са резолуцијом од 7 нм, пружајући 3Д приказ)
Принципи трансмисионе електронске микроскопије
Припрема узорка: Извршите следеће кораке на ћелијама да бисте припремили веома танке узорке (дебљине 20 до 100 нм)
Фиксација: Поправите ћелије помоћу глутаралдехида или тетроксида да бисте их стабилизовали.
Дехидрација: Узорак се затим дехидрира коришћењем органског растварача као што је ацетон или етанол.
Уградња: Узорак је уграђен у пластични полимер, који се затим стврдне и формира чврсту масу. Већина пластичних полимера је нерастворљива у води. Због тога узорци морају бити потпуно дехидрирани пре уградње.
Секција: Узорак се затим сече на танке делове ултрамикротомом и секције се монтирају на металне клизаче (бакар).
Техника замрзавања: Ово је алтернативни метод за визуелизацију органела унутар ћелија за припрему узорка.
Ћелије се брзо замрзавају, затим загревају → разбијају ножем да би се откриле унутрашње органеле → сублимирају → прекривају платином и угљеничним превлакама.
Мере за побољшање ЕМ контраста укључују:
Бојење растворима соли тешких метала као што су оловни цитрат и уранил ацетат
Негативно бојење тешким металима као што су фосфоволфрамна киселина или уранил ацетат.
Сенчење: Узорак је обложен танким филмом платине или другог тешког метала под углом од 45 степени тако да метал погађа микроорганизме само са једне стране.
